照附錄IV(B)進行。
對照品溶液
白花前胡甲素和白花前胡乙素混合對照品儲備液 Std-Stock(白花前胡甲素 400 mg/L和白花前胡乙素 120 mg/L)
精密稱取白花前胡甲素對照品2.0 mg和白花前胡乙素對照品0.6 mg,溶解於5 mL甲醇中。
白花前胡甲素和白花前胡乙素混合對照品溶液Std-AS
精密吸取白花前胡甲素和白花前胡乙素混合對照品儲備液適量,以甲醇稀釋製成含白花前胡甲素分別為5、 10、20、 40、60 mg/L;含白花前胡乙素分別為1.5、 3、 6、 12、 18 mg/L系列的混合對照品溶液。
供試品溶液
精密稱取本品粉末0.1 g,置125-mL 錐形瓶中,加甲醇50 mL,超聲(90 W) 處理30分鐘。濾過,取濾液轉移於50-mL量瓶中,加甲醇至刻度,用0.45-μm微孔濾膜(nylon)濾過,即得。
色譜系統
液相色譜:二極管陣列檢測器,檢測波長325 nm;4.6 × 250 mm 十八烷基鍵合硅膠(5 μm)填充柱;流速約1.0 mL/min。色譜洗脫程序如下(表3):前胡表3 色譜洗脫條件
時間(分鐘)水(%, v/v)甲醇(%, v/v)洗脫
0 – 30 25 → 5 75 → 95 綫性梯度
系統適用性要求
將白花前胡甲素和白花前胡乙素混合對照品溶液 Std-AS (白花前胡甲素 20 mg/L 和白花前胡乙素 6 mg/L)10 μL,注入液相色譜儀,至少重複5次。系統適用性參數的要求如下:白花前胡甲素和白花前胡乙素的峰面積相對標準偏差均應不大於5.0%;白花前胡甲素和白花前胡乙素峰的保留時間相對標準偏差均應不大於2.0%;理論塔板數按白花前胡甲素和白花前胡乙素峰計算分別應不低於9000和11000。 供試品測試中白花前胡甲素峰和白花前胡乙素峰分別與其鄰近峰之間的分離度均應不低於1.5。
標準曲綫
將白花前胡甲素和白花前胡乙素系列混合對照品溶液Std-AS 各10 μL,注入液相色譜儀,並記錄色譜圖。分別以白花前胡甲素和白花前胡乙素的峰面積與相應濃度作圖。從相應5點的標準曲綫得斜率、截距與相關
系數。
操作程序
將供試品溶液10μL,注入液相色譜儀,並記錄色譜圖。與白花前胡甲素和白花前胡乙素混合對照品溶液Std-AS 色譜圖中二成份峰的保留時間比較,鑒定供試品溶液色譜圖中白花前胡甲素峰和白花前胡乙素峰。二
色譜圖中白花前胡甲素和白花前胡乙素相應峰的保留時間相差均應不大於2.0%。測定峰面積,按附錄IV(B)公式分別計算供試品溶液中白花前胡甲素和白花前胡乙素的濃度(mg/L),並計算樣品中白花前胡甲素和白
花前胡乙素的百分含量。
限度
按乾燥品計算,本品含白花前胡甲素(C21H22O7 )不少於0.90%和白花前胡乙素(C24H26O7 )不少於0.24%。